空气中微生物检测

一、 实验目的

本实验用灭菌后的培养皿在空气中采样后并培养一段时间，测定空气中的微生物，其实验意义在于：

(1)了解空气中微生物的分布状况。

 (2)比较普通实验室和无菌室空气中存在的微生物的数量和种类。

 (3)验证无菌操作法在微生物学实验中的重要性。

二、 实验原理

空气是人类保持正常活动的物质条件，并与人类键康有着极为密切的关系，随着社会进入信息时代，空气微生物采样检测也得到了飞速发展，已研制出快速、敏感、特异，自动化程度高的各类仪器，为保持高质量的空气环境，应使用正确先进的空气监测方法。

在我们周围的环境中存在着种类繁多、数量庞大的微生物。空气中也不例外。虽然空气不是微生物栖息的良好环境。但由于气流、灰尘和水沫的流动，人和动物的活动等原因，仍有相当数量的微生物存在。

空气中微生物的采集方法很多，主要有用空气微生物采样器采样监测和用自然沉降采样法进行采样。本文就各类采样方法的性能做了介绍，使能正确选用各类采样方法。空气微生物采样主要涉及采样器、采样介质、采样方法及检验程度 4 个方面。 空气微生物采样器主要有：撞击式采样器、过滤式空气采样器、离心式空气采样器、气旋式采样器、静电沉降采样器等等。

当空气中个体微小的微生物落到适合于它们生长繁殖的固体培养基的表面时，在适温下培养一段时间后，每一个分散的菌体或孢子就会形成一个个肉眼可见的细胞群体即菌落。观察大小、形态各异的菌落，就可大致鉴别空气个存在的微生物的种类。本实验通过检测普通实验室和消毒后的无菌室空气中存在的微生物，从而判断无菌室的消毒效果，了解空气中常见的微生物类群。

三、 实验装置与仪器

1. 实验仪器

(1) 无菌平皿，数量若干套

(2) 酒精灯，数量×1

(3) 培养箱，数量×2

(4) 高压蒸汽灭菌器

(5) 干热灭菌器

(6) 冰箱

(7) 平皿（直径9cm）

(8) 量筒

(9) 三角烧瓶

(10) pH计

2. 实验所需试剂

(1) 蛋白胨，数量 10g

(2) 牛肉膏，数量3g

(3) 氯化钠 5g

(4) 琼脂 15-20g

(5) 蒸馏水 1000mL

四、 实验步骤

1. 琼脂培养基制作方法：将蛋白胨、牛肉膏、氯化钠、琼脂和蒸馏水混合，加热溶解，校正pH至7.4，过滤分装，121oC 20min分钟高压灭菌，用自然沉降法测定时，倾注约15mL于灭菌平皿内，制成营养琼脂平板。

2. 倒平板：按常法配置上述培养基，分装于三角瓶中，高压灭菌备用。临用前将培养基熔化，冷却至50℃左右，倒平板若干个备用。

3. 检测：先将无菌室的紫外灯打开，照射15min后关闭。打开上述冷凝了的无菌平板的皿盖，让其在无菌室空间和无人走动的普通实验室空间分别暴露5min或30min后，盖上皿盖。要求每种培养基的平板在每个空间设3个重复。

4. 培养：将细菌培养基平板和真菌培养基平板分别置37℃和28℃的培养箱中倒置培养，1—2d后开始连续观察，注意不同类别的菌落出现的顺序及菌落的大小、形状、颜色、干湿等的变化。

注意事项：

[1] 设置采样点时，应根据现场大小，选择有代表性的位置作为空气细菌检测的采样点，通常设置5个采样点，即室内墙角对角线交点为一采样点，该交点与四墙角连线的中点为另外4个采样点。

[2] 采样的高度通常为1.2-1.5m。

[3] 采样点应远离墙壁1m以上，并避开空调、门窗等空气流通处。

五、 实验结果

1. 实验数据记录

表1 菌落培养结果小结

2. 根据实验数据计算空气中菌落总数

采用平皿沉降法测定空气中菌落总数，计算公式为
细菌数（CFU）/ m³＝N×100/A×5/T×1000/10＝50000N/AT

注：A：平板面积（cm²）；

T：平板暴露时间（min）；

N：平板平均菌落数（CFU）；

六、 实验结果讨论

1. 空气中微生物检测的意义是什么？

2. 影响空气中微生物检测结果的因素有哪些？

3. 如何利用空气中微生物检测结果来评价环境空气质量？